为减少培养液的蒸发量和降低排气的相对湿度

216 发酵技术

附有冷凝器、旨在使高温的排气冷却，以防膜滤器烧毁。 图9-5S 和图9-56的结果如表9-11所示，表中数字为培养开始后12h内在膜滤器上捕集

到的话菌数，结果表明、排气仅通过药剂还不能完全灭菌。使用药剂时若能在排气鼓泡瓶内进行搅拌、消泡，则有一定的效果，用电热器将排气加热至200℃时，均未在膜滤器上检出

大肠埃希菌和酵母菌。

单位:个

表9-11 排气中的微生物

胶泡瓶 碱 电热器

0

611

大肠块希菌 980 40 0

酿消酵母 1

图9-57是基因重组菌培养装置中普遍采用的排气除菌系统。为减少培养液的蒸发量和降低排气的相对湿度，在罐排气口外安装冷凝器，其后才是加热器，排出气体经此加热至60~80℃。相对湿度降低可预防滤器上凝结水汽。除菌滤器与培养罐空气入口处的相同。

32-冷水

图 9-57 排气除菌处理示意

1-培养罐:2一气体冷凝器:3-电热器:4-深度型滤器

机械密封 通气搅拌培养罐中贯穿罐的搅拌轴需与传动部件连接。作为这部分的轴封使用的是机械密封，有单机械密封和双机械密封之分。前者由单密封面将罐与外界隔开。此密封部分因高速旋转产生摩擦热，故需冷却和润滑。这样一来，即便正常运转，培养液也会一点一点地渗人密封面，很有可能经此流出。同时，灭菌时的热膨胀差也会使流出量增加。这是培养结束后灭菌时最易外漏的原因所在。还有，机械密封受使用寿命所限，在溢漏发生前就应定期更换。所以单机械密封的培养罐不宜用于基因重组菌的培养。

双机械密封是用高于罐内压的压力，将贮存于另一润滑液槽中的无菌水压人机械密封部，用作轴封润滑液。这时，上、下两部分即使有一部分的密封液渗漏，培养液也几乎无外漏危险。但上，下两方同时溢漏时，培养液亦有可能外漏了。因此，问题在于搅拌轴是由罐的上部还是下部通入。从培养装置的使用优点及搅拌轴长度等角度看，用下搅拌为好。但若考虑培养液外漏的情况，培养基因重组菌时，以用上部搅拌的双机械密封为好。

用磁力方法改变搅拌动力的传动就不必担心机械密封的外漏了。10L以下的培养装置以往一直是用磁力进行动力传动的，但罐太大，会出现磁力不足、轴承磨损等问题。目前大至90L培养罐，已能用强磁力进行动力传动。现在，基因重组菌的培养罐仍采用双机械密封的

项目九 型发防产品的生产

盘界方式为多，其次是用双机频密封的下搅棉方式，

217

③取村普通络养镶的取样管港在取聘时会发出养品，取样后对转品管通灭需时，的培养液污水被排至排水管内。对此，必须采取措施，如用取样工具进行取样(图100，此法可在培养液不接触外养的条件下取样，用高压灭需器使其灭需或是连接后用天需，灭菌结束后移样品从罐中取出送人样品管中，取完所需的转品，卸下之前对取样管再次无,卸下经灭需的连接器,在安全柜中卸下样品管，取样中使用的排水管管通与麦无国贮罐相连，取释及灭需时产生的排水一并贮存于罐内，经灭离后排出，此外还设计了种安全取样用的器具，例如，通过双层橡皮膜，用注射器取样;把可移动的完全密封型的形箱与取样管连接，在此箱中取样等。

无空气一x

2

排污水管=

图9-58供重组菌用的取样装置

1一培养罐;2-连接器;2-样品营I:《一样品管2

但是这些操作都由人工控制，操作中难免出错。为了减少操作人员接近工程菌的机会，尽量不用人工操作面采用自动取样装置最为安全。图9-59为自动取样装置，取样方法与人工取样程序大致相同。同时，取样过程因采用程序系统控制而易于变动，取出的样品保存于冷库内，冷库内的空气经滤器过滤，内部也可进行灭菌。

3培养后的灭菌 培养后对养和管道等进行灭菌时，一开始流出的未灭菌排水有可能存在活的重组菌，取样、排液的管中能产生这类排水，因此，一定要另行安装排水管并与废液灭菌贮槽等相连接，以便排放污水,

⑤接种向罐内直接接种的方法是不安全的。简单的安全接种法是将种子瓶与培养罐以管相连接后，用无菌空气加压压人的方法。另一种方法是先把种子液在安全柜内移至供接种用的小罐内，再将其与培养罐连接，用蒸汽对连接部分灭菌后，把种子罐中的种子液接入培养罐内。

排液培养后要将培养液输送至贮罐等下一道工序，这时也有可能产生气溶胶和重细菌的扩散。安全的方法是在养开始前就将排液口与下段工序相连接并进行灭菌，这样培