种子罐扩大培养 发酵罐培养收集滤液

210 发酵技术

发酵液

斜面菌种

翔斯种子培养 预处理

板框压滤

种子罐扩大培养

发酵罐培养 收集滤液

天菌培养基 无菌空气 沉淀

板框压滤

湿酶饼 滤液

真空干燥 回收乙醇

粉碎 成品

图 9-51 培养枯草杆菌诱变菌株B.S.796生产a淀粉酶流程

⑥豆粕水解液的制备取豆粕粉加水10份浸泡2h，然后在1kgf/cm²下蒸煮30min,冷却至55℃，调pH7.5，加蛋白酶50~100U/g原料，作用2h，过滤后浓缩至蛋白质含量为50%，即得豆粕水解液。

©罐培养基的配制用上述麦芽糖液配置成含麦芽糖6%、豆粕水解液6%~7%、 NaHPO.12HO 0.8%、(NH)₂SO:0.4%、CaCl₂ 0.2%、NH,C10.15%、豆油1kg、深井水 500L，调pH6.5~7.0的培养基。

d.发酵罐培养罐培养基经消毒灭菌，冷却后接入3%~5%种子培养成熟液。培养条

间28~36h.

件为温度(37±1)℃，罐压0.5kgf/cm²，风量1~20h 为1:0.48，20h 后1:0.67，培养时 e.提取发酵结束后，于发酵罐内添加凝聚剂，pH6.3~6.5，升温至40~45℃后放人絮凝剂，维持一定时间进行预处理后，泵入板框压滤机进行过滤，水洗，合并洗液(或经浓缩放

2.β-淀粉酶生产

人沉淀缸内加入一定量淀粉，边搅拌边加入酒精)，沉淀，湿酶经真空干燥，即为成品酶。β-淀粉酶广泛存在于植物(大麦、小麦、山芋和大豆类)及微生物中。该酶很早以前就作为糖化剂用在酿酒、制糖工业中，1924年由Kuhn所命名，但微生物的β-淀粉酶直到1974年才被发现。目前，β-淀粉酶的研究还不及a-淀粉酶那样深入。植物β-淀粉酶的生产成本比较高，自1974年发现微生物能产生β-淀粉酶以来，目前在工业生产中得到应用。产以介绍。环状芽孢杆菌和链霉菌等。以下以吸水链霉菌FR1602或ATCC21772生产β-淀粉酶为例加β-淀粉酶的菌种研究较多的是芽孢杆菌属的多黏芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、

(1)工艺流程如图9-52所示。

保藏菌种 菌种活化 种了有大培养 项目九 典型发精产品的生产 211

干燥沉淀 过速

收单视电 骑托过度

粗酶制剂

图9-52 吸水链霉菌FR1602生产3-淀粉酶流程

(2)操作要点

①培养基的配制 n.种子培养基。玉米粉2%、小麦胚芽1%以及少量其他物质，pH为7.0。b.发酵培养基。玉米淀粉3%、脱脂乳1%。磷酸二氢钾0.2%、硫酸镁 0.05%，硫酸锰0.01%，并加入少量消泡剂。

培养方法将菌种接于9L种子培养基中，于28℃通气和搅拌培养24h，接入发酵罐培养。在500L发酵罐中加人300L发酵培养基，于121℃灭菌30min，然后使其冷却，接种子罐培养的种子，于28℃通气和搅拌培养85h。

③提取 发酵终了，将发酵液在40℃减压过滤，使其体积为原来的1/5。然后加入2倍体积冷乙醇到浓缩液中，使β-淀粉酶沉淀，干燥沉淀物即为粗酶制剂，酶活力一般可达40000U/g。

(四)蛋白酶生产

蛋白酶是水解蛋白质和肽链的一类酶的总称，它广泛存在于动物内脏、植物茎叶，果实和微生物中，但唯有微生物蛋白酶具有生产价值。微生物蛋白酶多以生产菌的最适pH为依据，分为中性蛋白酶、碱性蛋白酶和酸性蛋白酶。目前,已做成结晶或得到高度纯化物的蛋白酶达100多种,被广泛应用在皮革、毛纺、丝绸、医药、食品以及酿造等行业。

1.酸性蛋白酶生产

国内最先投产的酸性蛋白酶是采用黑曲霉3.350液体深层培养法进行生产，在毛皮软制革、羊毛染色、医药和啤酒澄清方面有广泛用途。以下介绍其生产工艺技术。

(1)工艺流程如图9-53所示。

安随瓶菌种 斜面菌种 种子培养 发酵

装盘 线袋过滤 盐析 离心过滤

烘干 包装 薄膜蒸发浓缩 除菌体

磨粉 包装

图9-53 黑曲霉3.350 生产酸性蛋白酶工艺流程

(2)操作要点

①种子培养将菌种接种于500L种子罐培养基中，于(31±1)℃、230r/min下通风培养26h，通风量为0.3VVM。

②发酵5000L 不锈钢发酵罐装3000L 培养基，于(31±1)℃、180r/min下通风培，控制通风量0~24h为1:0.25VVM;24~48h 为1:0.5VVM;48h至结束为